[PEET] 유전공학 실험총정리 - 요약본

소개글

PEET 생물 유전공학 실험 총정리 자료입니다.
문제풀이에 필요할때마다 핵심내용을 쉽게 확인할 수 있습니다.
웬만하면 다 있고, 다소 복잡한실험은 간결한 원리설명도있습니다.
여기저기 흩어져있는 유전공학및 생명공학실험을 한데 모았습니다.
기타 관련시험들을 준비하는 분들에게도 도움이 될거라 생각합니다.

목차

유전공학효소
핵산분해효소
-제한효소
-유전자가위 : CRISPR-Cas9
DNA 분리 및 정제
- 플라스미드 분리법
- 유전체 DNA 분리법
RNA 분리 및 정제
- 주의사항
- total RNA 분리법 : Trizol 분리법
- total mRNA의 분리
전기영동
- 특징
- 아가로오스겔 전기영동
- 겔상에서 DNA 확인법
재조합 DNA
-개론
-운반체(vector)
-재조합 DNA 제작 = DNA 클로닝
유전자 도서관
-유전체 도서관
-cDNA 도서관
-도서관 탐색법
PCR
서던혼성화 = southern blotting
DNA 염기서열 분석
-Sanger의 사슬종결법
-자동염기서열 분석법
-NGS
-Mxam-Gilber 화학적 분해법
유전체 지도
-세포학적지도
-유전자지도,연관지도 : RFLP,SSLP,SNP
-물리적지도
HGP : Human genom project
- 염기서열 분적법 : 지도-기반 서열분석, shotgun, 계층적 shotgun
유전자발현조절 부위의 분석
-DNA 족적법
-겔지연분석
-리포터 분석법
mRNA 전사물연구
-노던혼성화
-RPA
-DNA 미세배열분석
-FISH
-RT-PCR
-Real Time PCR
-RNA 염기서열결정법
유전자 발현억제
- 안티센스 RNA
- 간섭 RNA =RNAi
단백질체학
단백질 분리
- 염석
- 투석
- 크로마토그래피
단백질 확인
- SDS-PAGE
- 등전점 전기영동
- 2차원전기영동
- 웨스턴 블랏팅
- ELISA
단백질 상호작용 분석
- 효모 이중 혼성화법
- 공동면역침전법
- 표지단백질 침전법
동물유전공학
- 동물세포발현벡터
- 동물세포형질전환법 : 미세주입법, Knock-out mouse, 핵치환을통한형질전환
실물유전공학
- 아그로박테리움을 이용한 형질전환
- 기타
DNA 지문법 : STR, SNP-RFLP, Y-STR, mt RNA
유전병진단
유전자 치료
줄기세포

본문내용

응용범위
① 의약품 : 호르몬, 항암제, 성장인자(GF: 세포파트), 백신, 진단 시약, 인공장기 등의 대량 생산
ex) 인슐린 – 최초의 유전공학 의약품,
tPA – plasmin 활성화 → 혈전(피브린+혈구) 녹임, 작용장소 : plasminogen
EPO – 빈혈 치료제
② 환경

유전공학 효소
핵산분해 효소
S1 nuclease
ss 분해 – ssRNA, ssDNA
DNaseⅠ
DNA 절단 – ssDNA, dsDNA
RNase H
RNA-DNA 혼성체에서 RNA 분해

제한효소 (=RE)

DNA 특정 서열 인식 절단(인산이에스테르 결합의 가수분해)
→ 진정제균, 고세균이 생산하는 내부핵산분해효소 : 원래 면역작용
∴제한효소로부터 자신의 DNA 보호 : DNA 메틸화 효소 생산
유전공학에서 주로 typeⅡ : 4~8개의 염기서열 인식
- DNA에 인식 부위가 나타나는 빈도
ex) BamHⅠ : 6개 염기의 특이서열 인식 - =4096 염기쌍마다 발생
→ 서열이 길수록 절단빈도↓
종류 : BamHⅠ, CofⅠ, EcoRⅠ, EcoRⅡ, HaeⅡ, HindⅢ,PvuⅡ
유전자가위 CRISPR-Cas : 제한효소의 부정확성 해소
초기 유전자가위
ZFN: FokⅠ제한효소에 결합하는 ZF DBD포함 단백질
TALEN
---------------------CRISPR-Cas---------------------------
<세균 내 기작>
① 획득
세균의 유전자 서열:
[자기유전자–회문배열–간격서열–회문배열-자기유전자]
이때, 간격서열(=CRISPR)은 면역작용 후 획득한 파지 DNA
② 발현
간격서열 유사서열 보유 파지 투입
→ 간격 서열 전사 – 회문배열(tracrRNA)에서 절단
→ 간격서열 전사 RNA + tracrRNA(Cas9 holding) : crRNA 복합체
→ crRNA 복합체 + Cas9(핵산가수분해효소) 결합
③ 간섭
투입 파지의 상보적 DNA + 복합체 결합
→ Cas9이 파지의 dsDNA 절단
→ 세균내 파지 증식 억제

참고 자료

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