[인천대 생명공학실험3 A+] [BCA assay를 이용한 eGFP 형광측정]단백질 정량분석&활성측정 실험결과 보고서

소개글

A+를 쉽게 받을 수 있도록 매우 정리가 잘 되어 있는 [BCA assay를 이용한 eGFP 형광측정]단백질 정량분석&활성측정 실험결과 보고서 입니다.
eGFP 농도 계산, BCA assay, eGFP 형광측정, 흡수스펙트럼과 발광스펙트럼 및 단백질의 활성에 대한 이론을 포함하고 있습니다.
이론 외에 실험결과와 오차의 원인까지 포함한 고찰 및 결론 또한 체계적으로 꼼꼼히 적혀있습니다.

목차

1. Date
2. Title
3. Purpose
4. Principle
5. Materials & Methods
6. Result
7. Discussion
8. Conclusion
9. Reference

본문내용

3. Purpose
BSA assay를 통해 정제된 eGFP를 정성,정량분석하여 농도를 계산하고 형광 측정을 통해 unknown sample을 농도를 구한다. 또 eGFP의 흡수스펙트럼과 발광스펙트럼을 통해 문헌과 대조하여 단백질의 활성과 3차원 여부를 확인한다.

<중 략>

Materials
Thermo Pierce BCA assay kit, BSA standard, BCA reagent A (bicinchoninic acid solution) BCA reagent B [4% (w/v) cupric solution (CuSO4 • 5H2O)], PBS solution, 96 well plate, UV 플레이트 리더, 교반기, 형광 플레이트 리더, Multichannel pipette.

Methods
BCA assay: 2mg/mL BSA를 농도별(10,20,40,80,160,320배) dilution. 농도 당 100µL 3개와 blank 필요. Elution sample 10배 희석. 96 Well에 BSA와 sample 100µL씩 3개 Well에 로딩. Reagent A 와 Reagent B를 50:1로 섞어 필요한 양만큼 만듬. Well에 BCA Reagent 100µL 넣음. 플레이트를 흔들어 섞음. 은박지로 감싸고 37도, 30 min incubate. Plate reader를 562nm 파장에서 흡광도 측정.

참고 자료

윤문영 et al., 기초생화학, 2015, 자유아카데미, p 72-73, 102
안태호 et al., 단백질 프로토콜, 2012, 전남대학교출판부, p156-159, p166-167
Purves et al., Life: The science of Biology seven edition, Sinauer, 2007, p 201, 307-309
Reece et al., Campbell Biology Concept&Connection, 2011, PEARSON, p 64, 87,99, 356-358