E.coli transformation, bacterial transformation

소개글

Transformation 방법 (into E.coli)

목차

E.coli transformation
(1) Transformation of plasmid DNA into E.coli (CaCl2 /heat shock method)
(2) Transformation of plasmid DNA into E.coli (Electroporation)

본문내용

Ⅰ. E.coli transformation

◈ Transformation 방법 (into E.coli)
- Bacterial 세포가 외부로부터 DNA를 받아 들이는 과정을 transformation이라 한다.
- 각 세포는 침입을 시도하는 유전물질로부터 자신을 보호하도록 고안되어 있기 때문에 DNA는 자연적으로 세포 내로 들어갈 수는 없다. 따라서 여러 transformation 방법이 고안이 되어왔다.

1) Chemical method
- Calcium phosphate를 이용한 방법
2) Physical method
- Electroporation

(1) Transformation of plasmid DNA into E.coli (CaCl2 /heat shock method)

- Competent cell에 DNA를 첨가 시키면 cytoplasm에 들어가지 못하고 cell exterior에 남아있게 된다. 온도가 42℃로 올라가게 되면 비로소 DNA는 competent cell 안으로 들어가게 된다.
- E.coli (e.g. DH1, DH2, 그리고 MM294) 를 포함한 대부분의 박테리아 종들을 효율적으로 transform하기 위해서, 박테리아는 물리적 또는 화학적 처리를 통해 DNA 획득 능력을 증가시킬 수 있다. 이렇게 처리된 세포들을 `competent cell` 이라고 부른다.
- Calcium phosphate의 침전물을 세포가 효율적으로 받아들인다는 발견은 실험적 경험(관찰)을 기초로 알게 되었다. 사실, bacteria에서 2가 양이온인 calcium이나 magnesium등에 의해 DNA의 삽입이 잘 이루어진다는 것은 이미 알고 있었으며, 이러한 사실을 이용하여 2가 양이온인 calcium에 DNA를 흡착시키고 calcium phosphate의 침전물을 생성하여 세포가 이를 받아들이도록 유도하는 방법을 고안하였다.

참고 자료

없음