PCR&유전자조작(결과).

목차

◆ Abstract
◆ Information
◆ Material
◆ Results
◆ Discussion

본문내용

◆ Abstract


1. polymerase chain reaction을 이용하여 DNA에서 원하는 부분만을 증폭.
- template DNA, primer(F/R), DNA polymerase, dNTP, Buffer, UPW 혼합했다.
- 94℃에서 주형 DNA를 denaturation 시켰다.
(ddDNA의 base pairing(hydrogen binding)를 파괴시켜 ssDNA로 바꾸어준다.)
- 53℃에서 oligo nucleotide primer(약 10~20bp)를 target template에 annealing 시켰다.
- 72℃에서 primer에서부터 template에 대응하는 nucleotide를 extension 시켰다.
- 25cycle 반복했다.
(2의 x제곱의 개수만큼 유전자가 증폭된다.)
- 전기영동 하여 증폭결과 상태를 확인하였다.
→ 위쪽엔 희미하게 template, 600bp 근처에 증폭된 DNA가 나타났다.
아래쪽 primer가 보일 수 있는 자리에서 primer는 보이지 않았다.
우리 조는 얻어진 양이 많았으며 끌림 현상이 보였고 다른 조에 비해 DNA가 살짝 아래
부분에 위치했다.

2. 재조합 DNA 분자를 제조하기 위해 vector와 insert를 같은 제한효소 enzyme으로 절단.
- enzyme, DNA(insert, vector), 10xbuffer, 10xBSA, enzyme(Nhe1, BamH1), UPW 혼합했다.
- 37℃에서 오랜 시간 반응을 시켰다.
- 전기영동으로 DNA의 절단유무를 확인.

3. 제한효소 처리된 DNA에 ligase를 처리하여 최종적으로 재조합 DNA 분자를 제조.
- DNA(insert, vector), 10xbuffer, T4 ligase, UPW 혼합했다.
- 혼합된 것을 상온에서 4시간, 4℃에서 overnight, 15℃에서 4~15시간 효소반응.
- 전기영동으로 ligation 유무 확인.

참고 자료

- 생명공학실험1, 아주대학교, pp.15-26.

- 생화학, 김재호 외 5인, 淸文閣, 1997, pp. 86-188.

- 유전자클로닝입문4판, 이병무외4명, 월드사이언스, pp.6-13.

- 일반 유전학, Leon A. Snyder 외 2인, 아카데미서적, 1989, pp.428-501.

- 필수세포생물학, 박상대, 교보문고, pp.344-347.

- DNA학 입문, 야나기다 마쓰히로, 전파과학사, 1994, pp.217-270.