연세대학교 생화학실험(2) - SDS-PAGE & Bradford Assay

소개글

- Understanding the principles of polyacrylamide gel electrophoresis(PAGE)
- Construct standard curves and determine protein concentrations by the Bradford method

목차

◆ 실험일자
◆ 제출자
◆ 목적
◆ 원리
◆ 시약 및 기자재
◆ 방법
◆ 결과
◆ 고찰
◆ Further study

본문내용

◆ 목적
- Understanding the principles of polyacrylamide gel electrophoresis(PAGE)
- Construct standard curves and determine protein concentrations by the Bradford method

◆ 원리
*SDS-PAGE
Acrylamide gel은 DNA 또는 단백질의 전기영동에 이용될 수 있는데, 특히 단백질의 경우는 SDS(sodium dodecyl sulfate)를 포함한 SDS-PAGE(polyacrylamide gel electrophoresis)를 실시한다. Polyacrylamide gel은 acrylamide 가 N,N`-methylene bisacrylamide에 의해 cross-link 되어 형성된 중합체이다. Bisacrylamide에 의해 cross-link되어 생긴 gel은 gel자체의 강도와 탄성을 유지하고 SDS-polypeptide가 통과할 작은 구멍을 형성한다. 이 구멍의 크기는 bisacrylamide:acrylamide의 비율에 따라 변하며, 이를 조절해서 분리할 단백질에 따라 효과적으로 gel을 만들 수 있다.
이 gel을 만들 때에는 우선적으로 acrylamide의 polymerization을 시작해야 하는데, 이 때 사용되는 starting material이 ammoniumpersulfate와 TEMED이다. ammoniumpersulfate는 TEMED 촉매 하에서 free radical을 형성하여 acrylamide에 이 radical을 제공하여 polymerization반응을 시작하게 한다.
보통 SDS-PAGE는 두 가지의 다른 gel이 붙어있는 상태인 discontinuous 한 gel으로 전기영동을 시행하게 된다.

참고 자료

-http://blog.naver.com/tamiru?Redirect=Log&logNo=140018132988
-Bradford, M. M. (1976) A Rapid and Sensitive Method for the Quantitation of Microgram Quantities of Protein Utilizing the Principle of Protein-Dye Binding. Anal. Biochem. 72:248-254
-http://blog.naver.com/williamaz2?Redirect=Log&logNo=60018113291