[유전학 실험][서울대] RT-PCR과 PCR을 이용한 실험

소개글

[서울대학교]
유전학 실험 레포트로서, Transfection시킨 CFP가 cell안에서 잘 들어갔는지 확인하기 위해서 RNA를 이용하여 RT-PCR을 통해 reverse transcription시켜 cDNA(complementary DNA)를 만들고, 이 cDNA를 PCR을 이용하여 증폭시켜서 GFP가 있는지 확인하는 즉, Transfection이 잘 되있는지 알아보는 실험이다.

레포트에는 PCR와 RT-PCR방법이 무엇인지, 그리고 이들간의 차이가 무엇인지 기입했고

또한, 실험도구들의 설명과 함께 실험에 쓰인 시약들, 배지들에 대한 자세한 설명을 적어놨습니다.

목차

1. Introduction and Abstract

2. Materials and Method
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3. Results and Discussion

4. Reference

본문내용

이번 실험은 저번시간에 Transfection시킨 CFP가 cell안에서 잘 들어갔는지 확인하기 위해서 RNA를 이용하여 RT-PCR을 통해 reverse transcription시켜 cDNA(complementary DNA)를 만들고, 이 cDNA를 PCR을 이용하여 증폭시켜서 GFP가 있는지 확인하는 즉, Transfection이 잘 되있는지 알아보는 실험이다.
single RNA → cDNA로 바꾸는 과정이 reverse transcription이고 이를 수행하는 효소는 reverse transcriptase이다. 저번시간 Trnasfection시킨 RNA는 분석결과 300ng/㎕로 있다. 즉, 1㎕ 에 300ng (3.3㎕ 에 1㎍)이 있는 것이다.
DNA복제시 사용되는 효소인 DNA polymerase에는 primer 필요하다. 하지만 Reverse transcription시 RNA primer필요 없다. RNA에는 poly A가 붙어있기 때문에 oligo dT를 넣어주면 이것이 poly A tail에 붙어서 primer역할을 하기 때문이다.
RT-PCR시 total volume은 20㎕로 만들어 줘야 하며 이때 조성은 아래와 같다.
3.3㎕ RNA(1㎍) + 1㎕ oligo dT + 15.7㎕ DEPC-DW(RNase 없애는 역할)

참고 자료

① Bric 실험 (http://bric.postech.ac.kr)
② PCR관련, 동물유전육종학 및 실험 실습자료.