정량분석 자료모음

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PCR을 통한 방법으로 조작된 유전자를 검출해내는 것과 달리 조작된 유전자가 만들어내는 단백질을 검출하는 방법을 사용합니다. 이를 위하여 인체내의 면역체계에서 볼 수 있는 항원.항체 반응을 사용하게 됩니다. 면역학적인 방법 중에서는 ELISA 테크닉이 많이 활용되고 있으며, PCR과 비교하여, 빠른 시간안에 적은 비용으로 확인이 가능하다는 장점이 있으나 다음과 같은 단점 또한 가지고 있습니다.
- 도입유전자의 특성상 GM 단백질의 합성이 없는 경우 검출이 불가능하다.
- 가공식품의 가공과정에서 단백질은 DNA에 비해 훨씬 쉽게 파괴되어 가공식품에서의 적용이 힘들다.
- 낮은 수준의 GMO 혼입시에 정확한 정량이 힘들다.

? Real-time PCR의 기본 원리
Real-time PCR의 기본 원리는 DNA polymerase와 형광공명 에너지이동(Fluorescence Resonance Energy Transfer, FRET)의 원리에 의해 PCR의 매 주기마다 실시간으로 시행되는 형광의 검출과 정량에 있다. Real-time PCR에서의 정량은 PCR시 매 주기의 진행 상황을 감시하여 exponential phase 범위 내에서 실시간으로 증폭산물을 측정하는 방법으로, 이때 중요한 개념은 threshold cycle(CT) 또는 crossing point(CP)라는 수치이다. 이 값은 소식자의 분리에 의해 생기는 형광의 양이 기본값(baseline level)을 넘어서 감지될 수 있을 정도로 두드러지게 증가하는 시점의 주기수이며, 이는 초기 주형량을 비교적 정확하게 반영하는 것으로 알려져 있다. 한편 1997년 real-time PCR에 도입된 melting 곡선 분석은 두 가닥의 DNA 증폭산물이 한 가닥의 DNA로 변성되는 melting 온도를 이용한 것으로, 마지막 PCR 주기가 끝난 후 온도를 천천히 올려 증폭산물의 열 변성에 따른 형광의 감소를 인지하게 된다. 이 분석은 특이적인 증폭산물을 primer-dimer나 다른 비 특이적인 증폭산물로부터 구별하여 확인할 수 있으며, 소식자나 표지된 시발체를 사용하여 DNA의 단일 염기변화를 검출할 수 있어 유전형 검사나 점 돌연변이와 같은 단일염기다형성(single nucleotide polymorphism, SNP)의 검출에도 사용되고 있다.

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