미생물 실험 결과 report SDS PAGE

소개글

미생물 실험 결과 레포트입니다~
실험 과정, 결과, 디스커션 상세합니다
레포트 점수 A 받았습니다

목차

1 Purpose
2 Materials
3 Procedure
4 Observation & Data
5 Discusison
6 Question
7 Reference

본문내용

Procedures
- 단백질 시료의 준비
1. E.coli BL21(DE3)-(pACYCduet-ADH-His) colony를 따서 전배양한다.
(30 ℃, 200 rpm overnight)
2. 다음 날 아침 50 ㎖ LB broth에 1 ㎖ transfer 한다.(37 ℃, 200 rpm 으로 배양)
3. E.coli의 OD 값이 0.6에 다다랐을 때, induction : IPTG 0.1 mM (16℃,200rpm14시간배양후,cellharvest)

- 시료의 전처리
1. Harvest 된 sample에 phosphate buffer 500㎕를 넣는다.
2. Sonicator를 이용하여 cell을 깬다.
3. 15분 동안 원심 분리하여 Protein을 soluble, insoluble fraction으로 분리한다.
4. insoluble fraction에 buffer 500㎕를 넣고, suspension 하여 pellet을 풀어준다.
5. soluble fraction과 insoluble fraction을 각각 e-tube에 20㎕씩 담는다.
6. 2Xsample buffer 20㎕를 sample과 섞어준다.
7. 5분간 100℃에서 처리한다.

- Casting & Running (Denaturing SDS-PAGE)

- Protein Electrophoresis

- 염색(Gel strain) &탈색(Destraining)

1. 염색은 전기영동이 끝난 후 gel을 조심스럽게 gel판으로부터 분리한 후 플라스틱 또는 유리용기에 옮기고 staining solution(Coomassie Brilliant R250 들어있음) 을 붇는다.
2. Shaker에 올려놓은 후 2시간 염색한다.
3. 탈색은 수돗물로 가볍게 세척해 주고 destaining solution을 부어준 후 shaker에 올려놓는다.
4. Destaining solution을 수차례 교환하면서 gel의 염색시약이 모두 빠지도록 한다.

참고 자료

없음