계란노른자로부터 pc추출 예비보고서

목차

1. 실험목적

2. 실험원리
(1) Plasmid DNA
(2) Plasmid Purification
(3) Alkaline lysis method
(4) Plasmid Purification에 사용되는 용액
(5) DNA 전기영동의 기본 원리
(6) Agarose gel 전기영동
(7) Agarose gel 전기영동 시 DNA의 이동에 영향을 주는 요인들
(8) Agarose gel 전기영동 실험 시 고려할 사항들

3. 시약 및 기구

4. 실험방법

본문내용

1. 실험목적
- Recombinant plasmid DNA가 들어있는 E.coli에서 plasmid를 직접 추출해 본다.
- DNA Purification 한 것을 Agarose Gel 전기영동을 통해 DNA를 크기별로 분리하여 확인한다.

2. 실험원리
(1) Plasmid DNA
- Chromosomal DNA와는 별도로 Bacteria 내에서 발견되는 작은 DNA. Chromosomal DNA와 비교해 볼 때 크기가 상당히 작고 스스로 복제가 가능하다.
- 인위적으로 Plasmid를 다른 Bacteria에 감염시킬 수 있고, 이를 이용해 유전형질을 쉽게 변환시킬 수 있으며, 순수하게 분리·정제하기도 쉽기 때문에 Plasmid는 현대 분자 생물학에서 가장 널리 사용되는 유용한 도구가 되고 있다.
- 세균의 세포 내에 염색체와는 별개로 존재하면서 독자적으로 증식할 수 있는 DNA로, 고리 모양을 띠고 있으며 세균의 생존에 필수적인 유전자는 아니다. 유전공학에서는 세균 내 플라스미드를 세포 밖으로 빼내고 제한효소로 끊은 뒤, 필요로 하는 유전자를 삽입하여 이를 다시 세균에 넣어 배양하는 유전자재조합 기술을 사용한다.

<중 략>

* DNA 전기영동
- 시약 : 전기영동 buffer(10xTAE), LE Agarose, Ethidium bromide, 증류수
- 기구 : 원심분리기, Vortex, 1ml tube, DNA binding column tube, collection tube, 마이크로피펫, 전기영동장치, electrophoresis tank, gel cast, UV, 비닐장갑, 목장갑
4. 실험방법
★ A. Plasmid purification
0. Conical Tube에 보관되어 있던 sample(e.coli)를 꺼낸다.
1. 냉장보관 되어있는 250ℓ Buffer ①를 conical tube의 sample에 넣고 강하게 vortexing 1.0 sec 한다.
(→ cell이 보이지 않을 때까지, e-tube용 vortexing기계 위에 올리고 살짝만 눌러 주면 됨.)
2. 2.0 mL e-tube에 옮긴다.
3. 250 ㎕ Buffer ②를 넣고 e-tube를 3~4번 invert(손으로 뒤집으면서 약하게 섞어줌)
(☞ vortexing 기계를 사용하는 것은 금물.)

참고 자료

없음