양배추로부터 PLD 추출 예비

목차

Ⅰ 실험 목적
Ⅱ 실험 원리
Ⅲ 시약 및 기구
Ⅳ 실험 방법

본문내용

Ⅰ 실험 목적
전기영동(electrophoresis)을 통해서 단백질을 분리할 수 있다.

Ⅱ 실험 원리
0. 전기영동(electrophoresis)

단백질이나 핵산 등의 고분자 물질은 하전을 띠므로, 이를 기초로 하여 이들 분자를 전기장을 띤 매질(겔)에서 이동 분리시켜 이들의 순도나 성질의 분석 및 분리 등에 사용하는 방법을 전기영동(electrophoresis)라 한다.
이 방법은 단백질이 분리될 뿐 아니라 눈으로도 볼 수 있으므로, 혼합물에 들어 있는 다른 단백질 수 또는 특정 단백질 시료의 순도를 연구자가 재빨리 추정할 수 있다.
전기영동을 통해 등전점과 대략적인 분자량과 같은 단백질의 중요한 성질을 결정할 수 있다.

<중 략>

⑥ 전기영동장치를 연결하고 전압 및 전력을 확인한다.
(→ MOPS buffer 사용하므로 200 V, 80 mA, 전압 또는 전류는 일정하게 유지)

⑦ 전기영동을 시작한다. (약 1 hr 20 min 소요)
(→ 입자의 이동 속도는 입자의 알짜 전하와 입자의 마찰 계수에 의해 결정)

⑧ 푸른색이 gel 아래쪽 1 cm 정도 떨어진 지점에 도달하면 그만둔다.
(→ Running buffer은 다시 원래의 보관함에 부어둔다.)

⑨ 전기영동장치로부터 gel의 틀을 분리하여 증류수로 씻고 틀 안에 있는 gel을 분리한다.
(→ 틀의 모서리에 틈이 있는데 이 부분을 약수저를 이용하여 살짝 비틀어주면 쉽게 열 수 있음.)

참고 자료

생물리화학길라잡이, Life Science
약품생화학실험, 약품생화학분과위원회 저
레닌저 생화학(상)