Immunocytochemistry

목차

1. Result and Discussion
1) Plaque assay demonstration
2) Immunocytochemistry

2. References

본문내용

우선 원리를 살펴보면,
(1) 면역염색: 조직 내에 존재하는 특정 물질(특히 protein)을 detect하기 위해 시행되는 염색으로, 확인하고자 하는 물질에 대한 항체만 있으면 실험이 가능하다. 이것은 광학현미경 수준에서 관찰하는 면역조직화학(immonohistochemistry)과 전자현미경 수준에서 관찰하는 면역세포화학(Immunocytochemistry)으로 구분하는데, 우리는 immunocytochemistry를 거꾸로 이용하여(물론 EM은 아니었지만), HSV Ag이 발현되었음을 CPE를 통해 확인한 vero cell에 혈청을 반응시키고 여기에 2차 항체 결합 및 발색 반응을 일으켜 혈청 내에 anti-HSV Ab가 존재하는지, 그리고 존재할 경우 그 역가가 어느 정도 되는지를 측정하였다. Ag(여기서는 HSV-1, HSV-2에 감염된 vero cell)을 슬라이드에 loading하고 고정시킨 뒤, 1차 항체(여기서는 serum)와 결합시킨다. 그리고 나서 HRP(Horse Radish Peroxidase)가 결합된 2차 항체를 primary antibody에 결합시킨 뒤 substrate인 DAB (diaminobenzidine)와 H2O2를 섞어서 넣어주면 발색 반응이 일어나게 된다. 중간에 washing을 반복하기 때문에 혈청에 1차 항체가 없었다면 발색반응이 일어나지 않을 것이다.

참고 자료

대한미생물학회, 『의학미생물학실습』, 서흥출판사, 제 5판, 2005.
이건섭 외 6명, 『진단 병원미생물학』, 고려의학, 개정 3판, 1998.
Patrick R. Murray 외 2명, Medical Microbiology, 6/ed, 2009, ELSEVIER