[생화학실험] 중합효소연쇄반응법(PCR)과 전기영동을 이용한 LacZ gene의 확인

목차

1. 실험 날짜
2. 실험 제목 및 목적
3. 개요 – 이론 및 실험 원리
4. 실험재료 및 방법
5. 실험결과
6. 고찰
7. 참고문헌

본문내용

PCR이란? (정의 및 원리)
PCR(Polymerase Chain Reaction)은 DNA(주로 specific한 짧은 염기)를 in vitro에서 대량으로 증폭하는 실험방법으로 1984년에 Kary Mullis에 의해 고안되었다. PCR 과정은 먼저, template DNA를 denature시키면서 시작된다. 알려진 sequence부위에 상보적으로 결합하는 짧은 single strand DNA를 denature시킨 template DNA에 붙이게 되고, Taq polymerase에 의해 5'에서 3'으로 DNA synthesis가 일어남으로써, 한 cycle의 반응이 이루어진다. 이를 계속적으로 반복시키게 되면, 원하는 DNA부분만을 exonential하게 얻을 수 있게 되는데, 대게 25~30회를 반복하게 되면 수 십 만 배 정도 증폭된 DNA를 얻을 수 있게 된다. 이론적으로는 n cycle 반복 시에 {2^n-2(n+1)}x 만큼 원하는 DNA를 얻을 수 있게 된다. ( x는 원래 주어진 template의 농도 )

2. PCR의 각 단계
1) Denaturing
 PCR의 가장 첫 단계이며, 온도가 높아짐에 따라 DNA의 염기 사이에 있는 수소결합이 끊어져 두 가닥의 DNA가 분리된다. 일반적으로 94℃ 정도에서 진행된다.
  2) Annealing
 각각 두 가닥으로 분리된 DNA molecule에 primer가 붙는 과정이다. Primer는 그들과 상보적인 염기를 가지고 있는 DNA 서열에 달라붙는다. 이 과정이 바로 PCR의 accuracy를 결정짓는 단계이며, 어느 온도로 진행되는 가는 primer의 길이와 그것을 이루고 있는 염기의 종류에 따라 달라진다. 만약에 온도가 너무 높으면 primer가 DNA molecule에 잘 달라붙지 않아 그 효율이 떨어지며, 반대로 온도가 너무 낮을 경우에는 primer가 mismatch할 확률이 높아서 정확도가 그만큼 더 떨어진다. 일반적으로 온도는 아래의 식에서 결정된다.

참고 자료

http://blog.naver.com/kirokkk123?Redirect=Log&logNo=90191998603
http://mbgl.donga.ac.kr/%EC%9C%A0%EC%A0%84%EA%B3%B5%ED%95%99_5.htm
http://blog.naver.com/PostView.nhn?blogId=selrim11&logNo=40017616085
http://bric.postech.ac.kr/myboard/read.php?Board=exp_qna&id=418754