Northern blotting

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최초 등록일: 2014.09.13
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Ⅰ Introduction

Transfer of denatured RNA to membranes
Transfer of RNA from gels to nylon membranes at neutral or alkaline pH
-Transfer to positively charged nylon membranes at alkaline pH
-Transfer to uncharged nylon membranes at neutral pH

Ⅱ MATERIALS

주의사항: protocol에 이용되는 시약들은 DEPC-treated H2O를 사용해야 합니다.
DEPC(diethyl pyrocarbonate )는 histidine을 선택적으로 alkylation시키는 물질입니다. 대부분의 RNase들의 active site에는 Histidine이 있고 따라서 DEPC는 효과적으로 RNAse를 inactivation시킬 수 있는 것입니다.

Buffers and Solutions
Ammonium acetate(0.1 M) with 0.5 ㎍/ml ethidium bromide (step 13)
Methylene blue solution
= 0.02% (w/v) methylene blue (Sigma, 89% pure) in 0.3 M sodium acetate (pH5.5)
Soaking solution
= for charged membranes, use 0.01 N NaOH combined with 3 M NaCl
= for uncharged membranes, use 0.05 N NaOH
0.2 x SSC with 1% (w/v) SDS

참고 자료

없음

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