단백질 추출 및 SDS-PAGE 검출

목차

1. Experiment
2. Experiment Method
3. Attention
4. Result
5. Discussion
6. Reference

본문내용

1. Experiment
실험에 필요한 시료로서 40% Arcylamide와 1.5M Tris-HCl Buffer(pH 8.8)과 0.5M Tris-HCl Buffer(pH 6.8), 10X Tris/Glycine/SDS Buffer, TEMED, 2-Mercaptoethanol(or DTT)가 필요하며 2X Sample Loading Buffer, Staining solution, Protein ladder, 대장균이 필요하다. 또한 10% SDS와 10% APS을 제조해서 사용하고 Buffer A의 조성은 20mM Tris-HCl (pH 8.8), 20% Sucrose, 1mM EDTA, 5mM MgSO4 in water를 준비한다.

각 시료의 역할을 살펴보면 SDS의 작용은 amphopathic의 특성을 가지는 대표적인 detergent로서 단백질과 가장 강력한 결합력을 보여주는데 일반적으로 단백질을 구성하는 아미노산 2개에 SDS 1개 정도가 결합하게 되어 단백질들을 고유의 전하를 다 잃어버리고 SDS에 의해 – 전하를 띄게 된다. SDS의 작용으로 denatured된 단백질은 막대기처럼 펼쳐진 상태로 acrylamide가 이루는 그물구조를 통과하게 된다.

따라서 크기가 큰 단백질일수록 그 길이가 길어 그물구조를 빠져 나오는데 시간이 오래 걸리기 때문에 이동속도가 느려지게 되고 이를 통해 단백질들을 분리하게 된다. TEMED는 생선 비린내 비슷한 냄새를 풍기는 발암 물질으로써 Hood 아래서 작업을 하고 응고 촉진제 역할을 한다. gel을 plate에 부어 넣기 직전에 넣어줘야 한다. Acrylamide은 APS(Ammonium persulfate)와 TEMED로 인해 중합반응된 가교제(Cross-link) 역할을 한다. APS는 개시제로서 자유라디칼을 생성하여 Acrylamide와 bisacrylamide의 중합 반응을 유도하는 물질이다.

참고 자료

Lauren Cassidy, “ASTROBIOLOGICAL IMPLICATIONS OF GUANOSINE GELS AND ANALYSIS OF ABIOTIC RNA POLYMERIZATION”, 2014
강호일, “(고감도ㆍ정량적인 검출해석을 위한) 전기영동 최신 프로토콜 ,2006.