생명과학실험 레포트4 SDS PAGE gel 제조 Coomassie brilliant staining
- 최초 등록일
- 2016.09.29
- 최종 저작일
- 2013.04
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목차
Ⅰ. 실험 일시
Ⅱ. 실험 목표
Ⅲ. 실험 목적
Ⅳ. 실험원리
Ⅳ. 실험원리
Ⅴ. 실험 재료
Ⅵ. 실험 방법
Ⅶ. 실험 결과
Ⅷ. Discussion
Ⅸ. 참고문헌
본문내용
Ⅰ. 실험 일시
2013 / 4 / 5 (금) 3:30pm ~ 5:30pm
Ⅱ. 실험 목표
Protein Mixture 를 SDS - PAGE 를 통해 size 별로 분리한다.
SDS - PAGE 실험을 위해 SDS - polyacrylamide gel 을 제조한다.
Ⅲ. 실험 목적
첫째, SDS - PAGE 와 전기영동에 관한 원리 및 기본지식을 익힌다.
둘째, 지난 실험에서 만들어 놓은 Gel loading sample 을 SDS - PAGE 를 통해 size 별로 분리한 뒤 단백질을 염색하여 Protein marker 와 비교하여 단백질의 분자량을 추정해본다.
Ⅳ. 실험원리
- SDS - PAGE 원리
단백질의 전기영동에서는 SDS-PAGE 가 가장 일반적인 방법으로 이용되고 있다. SDS-PAGE 의 원리는 단백질은 구성하는 아미노산에 의해서 (+) 혹은 (-) 전하를 띄지만 SDS 가 단백질과 결합하게 됨으로써 일시적으로 모든 분자들이 (-) 전하를 띄게 한다. 그리하여 양단에 전압을 걸어주면 모든 분자들이 양 (+) 극으로 이동하게 되고, gel 의 pore 사이즈에 의해서 걸리는 전기력의 차이로 인하여 protein 의 size 에 따라 각각의 단백질을 분리하게 되는 것이다. Protein 의 이동 거리는 일정하고 모두 음전하로 대전되었으므로 protein 의 분자량이 작거나, 걸어주는 전압이 강하면 protein 의 이동 속도가 빨라지게 된다. 하지만 이러한 단백질의 전기영동에서도 뭉쳐져 있는 단백질을 바로 분자량에 따라 분류할 수 없으므로 SDS-PAGE 는 두 단계로 진행된다. 첫 번째 단계는 뭉쳐져 있는 단백질들을 차곡차곡 쌓아서 Stacking 하는 과정이고 두 번째 단계는 본격적으로 차곡차곡 쌓여진 단백질들을 분자량이 작은 순으로 빠르게 양 (+) 극으로 이동하는 Running 과정으로 이루어진다.
참고 자료
생물학 실험서, 라이프 사이언스, 민철기, 강창수
단백질실험노트 (하), 월드사이언스, 김승호, 장규태
실험생화학, 월드사이언스, 김승호, 장규태