지방세포 분화 정도 분석을 위한 정성 정량 분석

목차

1. Title
2. Date
3. Name
4. Purpose
5. Materials
6. Methods:
7. Results:
8. Discussion
9. Project

본문내용

1. Title : 지방세포 분화 정도 분석을 위한 정성 정량 분석 (Oil-Red O staining)
2. Date :
3. Name :
4. Purpose : 지방세포로 분화된 줄기세포의 분화 정도를 측정하기 위하여 지질을 특이적으로 염색하는 Oil Red O를 사용하여 염색한 후, 현미경을 통하여 분화정도를 정성 분석함. 분석 후, Isopropanol 용매를 처리하여 염색약을 용해 시켜 흡광도를 측정함으로서 정량적으로 분석함.
5. Materials : ORO, Isopropanol, formalin, PBS, DW, syringe, filter, IGEPAL, ORO stock solution : 0.5% in iso-propanol
6. Methods:
① 35 mm dish (6-well)에 준비된 세포의 배지 제거 후, PBS 1ml 로 워싱을 두 번.
② formalin 950 ul 처리 후, 10 min incubation
③ incubation 시간동안 60% Oil Red O 4ml 제조 (용매는 DW)
④ PBS washing 1ml 1 time
⑤ suction 후, 60 % isopropanol washing
⑥ airdry 10min
⑦ after ORO filtering, treat 1ml
⑧ incubate 30min
⑨ wash with 60% Isopropanol 1ml 1 time, PBS 1ml 1 time
<-treat PBS and take pictures>
⑩ 100% Isopropanol 1 ml, incubate 20min on rotor
⑪ ELISA 492nm

<중략>

8. Discussion
Oil Red O staining실험을 했다. Oil Red O staining이란 줄기세포의 분화 정도를 측정하기 위해서 지질을 특이적으로 염색하는 oil red o를 사용하여 염색한 뒤 현미경을 통하여 분화 정도를 정성 분석하는 실험이다. Isopropanol을 처리하여 염색약을 용해시켜 흡광도를 측정하면 정량분석도 가능하다. 줄기세포는 크게 배아줄기세포, 성체줄기세포, 그리고 IPS cell 3종류가 있다.

참고 자료

간호학대사전, 1996. 3. 1., 한국사전연구사)
농업용어사전: 농촌진흥청- 용성색소 [ lysochrome , 溶性色素 , ようせいしきそ ]
Tuch BE (2006). "Stem cells—a clinical update". Australian Family Physician 35 (9): 719–21. PMID 16969445.
Ron Winslow (2009). "First Embryonic Stem-Cell Trial Gets Approval from the FDA". The Wall Street Journal. 23. January 2009.
Beaudoin, A. New technique for revealing latent fingerprints on wet, porous surfaces: Oil Red O. Journal of Forensic Identification, 2004, 54 (4), 413-421.