Enzyme kinetics: Enzyme activity evaluation of glucose oxidase-Enzyme kinetics of glucose oxidase

목차

1. 실험목적
2. 실험방법
3. 실험결과
4. 고찰

본문내용

<실험목적>
Glucose oxidase라는 효소의 glucose양에 따른 속도를 확인해본다. 또 이를 통해 Michaelis-Menten, Lineweaver-Burk, Hanes-Woolf 그래프를 그려보고 이를 통해 효소 활성에 대해 알아본다.

<실험방법>
1. Glucoseoxidase(GOx)를 산화시켜준다.
(GOx 1mg과 IO4- 1.5mg, PBS 1ml 를 1h, 4℃ 혼합시켜준다)
2. Alumina slurry를 짜서 전극을 10분동안 갈아준다.
3. 전극을 20mM cystamine에 1h동안 담가 놓는다.
4. DDW로 씻어준다
5. 전극을 GOx에 30분동안 담가 놓는다.
6. PBS로 씻어준다.
7. Serial dilution을 통해 100, 50, 25, 12.5, 6.25, 3.125, 0 (mM) 농도의 glucose solution을 각각 2ml씩 만들고 0.2mM FcOH solution 2ml씩 넣어준다.
8. 각각의 CV를 측정한다.

< 중 략 >

<고찰>
이번 실험은 glucose oxidase효소의 활성 속도를 CV를 측정해 알아보는 실험이었다. CV 그래프에서 0.4v의 glucose 농도 별 전류값을 속도로 놓고 Michaelis-Menten 그래프, Lineweaver-Burk 그래프, Hanes-Woolf 그래프를 그려보았다.
먼저 Michaelis-Menten 그래프를 보면 이론적으로 비슷한 모양의 그래프가 나왔지만 오차가 생겼을 것이다. 그 이유에 대해 생각해 보면 먼저 glucose oxidase는 pH5-6에서 최적으로 활성이 된다고 한다. 왜냐하면 glucose oxidase는 β-D-glucopyranose에만 작용해 산화시키는 효소이다. 하지만 pH7 정도에서 glucose는 약 63.6%의 β-D-glucopyranose와 약 36.4%의 α-D-glucopyranose로 구성되어 있다.

참고 자료

Stryer, 핵심 생화학, 범문에듀케이션, 2014, p.83,85
Zumdahl, 줌달의 일반화학, 사이플러스, 2014