Transformation(형질전환) 실험방법 / 성공률을 높이는 방법, 비법 수록 / 꿀 tip

소개글

Transformation(형질전환)의 실험법에 대해 자세히 기술했습니다.
대학원에서 사용하던 실험방법으로 매우 전문적인 프로토컬 입니다.

기본이론, Transformation 확률을 높이는 꿀팁, 적절한 Vector와 DNA 절편의 비율 계산법, 가장 효율이 높은 Heat-Shock 시간, 실험방법 등을 자세히 기술했습니다.

생명공학, 유전공학의 가장 기본인 Transformation 입니다.
대학 수업의 자료로서, 대학원생들의 실험 성공률을 높이는 방법으로 이용해보세요~!

목차

1. Transformation 이론
2. 실험 꿀 Tip
3. Vector 단순복제 vs Ligation 이후 복제
4. 실험방법
5. Con.Cell 양에 따른 Heat-Shock 시간
6. Insert DNA, Vector 비율 계산법

본문내용

<간단한 이론! Transformation이란?>
특정한 DNA 절편을 유기체 내로 삽입하여 특정 DNA가 지니는 새로운 유전형질을 발현
시키는 방법이다. 주로 대장균(E.Coli)을 통해 유전자를 도입하며, 동물 및 식물세포에서도
도입하여 GMO(Genetically Modified Organism)을 만들 수 있다.

<성공률을 높이는 실험 꿀 Tip>
* Com.cell의 밀도가 높을 것 & 항시 Efficiency가 보장되어 있을 것.
* Com.cell은 매우 약한상태임을 명심할 것. (꼭 필요한 경우만 물리적충격 가할 것)
* Ligation 산물을 제외하고는 DNA의 양이 적을 것.
*Ampicillin은 recovery 상관x, Kanamycin은 recovery 반드시 필요

1)단순히 Vector 복제시
Com.cell 50~100μL당 500pg/μL 정도의 DNA를 사용한다.

2)Ligation 이후
Com.cell 50~100μL당 10~20μL 정도의 Ligation 반응물을 사용한다.

참고 자료

없음