[A+레포트]생명과학실험1 - 브래드포드 단백질 정량법

소개글

보고서 점수 A+받은 생명과학실험1 레포트입니다.

목차

A. Introduction
1. Bradford Assay 란?
2. 단백질 표준곡선
3. 파이펫 사용법

B. Materials

C. Experimental Method

D. Result
1. 측정한 흡광도(OD)값을 기입하세요. 감자추출물의 경우, 흡광도(OD)값을 기입하고 적절한 농도를 계산할 시료를 선택한 후 그 이유를 작성하세요.
2. 제공된 BSA 농도는 1mg/ml이다. 다음 주어진 BSA의 농도를 바탕으로 빈 칸을 채우세요.
3. 표준곡선을 그리고 회귀 방정식과 결정계수를 통해 자신의 표준곡선을 평가해보세요.
4. 감자추출물의 단백질의 양을 계산해 보고 시료의 총 부피가 3ml이라면 그 안에 있는 단백질의 총량을 계산해보세요.

E. Discussion

본문내용

1. Bradford Assay 란?
산성용액에서 적갈색을 띄는 Commassie Brilliant Blue 염료(470nm))는 단백질의 특정 아미노산과 결합했을 때 단백질 복합체 형성에 의해 빛의 파장이 바뀌고(595nm), 파란색으로 변하게 된다. 이 때 분광광도계(UV-Visible spectrophotometer)를 이용하여 흡광도 변화를 측정함으로써 단백질을 정량할 수 있다. Bradford 단백질 정량법은 매우 빠르고 비용이 낮은 장점이 있으나, 의미있는 농도범위가 좁고 다른 화학 물질-단백질/염료간 상호작용이 분석을 방해한다. 그림 1은 Coomassie Brilliant Blue 염료의 구조를 나타낸 것이다.

2. 단백질 표준곡선
단백질 정량을 위해서는 기준이 되는 표준 단백질이 필요한데, 보통 BSA(bovine serum albumin)을 많이 사용한다. 표준 단백질로 만든 용액을 농도에 따라 흡광도를 측정하여 y축은 흡광도값, x축은 농도가 되도록 표준곡선을 plotting한다. 농도 미정시료의 흡광도 값은 표준곡선 범위내에 위치해야 그 값을 신뢰할 수 있으며, 결정계수가 1에 가까워야만 한다.
3. 파이펫 사용법
파이펫은 용량표기부분/ 실린더/ 일회용 팁으로 구성되며 용량 조절 후 팁을 꽂고, 액체 흡입 후 용기에 배출시킨 후 사용한 팁은 폐기한다.

B. Materials
증류수, 볼텍스, 분광광도계와 셀, Bradford 용액, 1.5ml 튜브, 20ul, 200ul, 1ml 파이펫과 팁, 표준단백질(BSA), 농도 미정시료(감자 추출물)

C. Experimental Method
※ 주의사항
- 오염방지를 위해 파이펫 팁은 1회 사용후 폐기하고, 새 것으로 사용한다.
- 오차 발생을 최대한 막기 위해 정확한 계량 후 신중하게 용액을 제조한다.
실험 1. BSA와 감자추출물의 순차적인 희석
① 1.5ml 튜브 7개를 준비한다.
② 각각의 빈 튜브에 BSA와 감자추출물을 희석할 희석배수를 기입한다.

참고 자료

석수진. Dye-based protein detection. from https://www.thermofisher.com/kr/ko/home/life-science/protein-biology/protein-assays-analysis/protein-assays/bradford-assays.html