한양대 에리카(ERICA) 분생 세포생물학실험 리포트

소개글

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목차

1. 1~2주차 논문 해석 번역
2. 3주차 부터 모든 실험노트 모음 (모든 실험노트 만점)

본문내용

- 실험 방법
세포가 원래 발현하지 않는 AtTIR1 단백질을 Myc로 항체가 인식가능하게 꼬리표를 붙이고 (Tagging) 갈락토스유도 프로모터 (GAL-inducible promoter)하에 발현 시켰다. 효모에서 Cdc53 단백질은 Cul1 단백질에 대한 상동(homologs) 단백질 이며, Flag로 꼬리표를 붙였다. Immunoblotting을 위해 Myc, Flag에 각각 결합 할 수 있는 서로 다른 항체를 사용했다. [그림2-a]와 같이 총 4개의 효모 strain(두 단백질 모두 발현 안함, 한 단백질만 발현함, 두 단백질 모두 발현함)을 사용했으며, 갈락토스가 포함된 배지에서 세포를 배양했다. 일반적인 방법에 따라서 (생략) 세포내에서 단백질을 추출하여 왼쪽부터 1번~4번 라인에 동량의 단백질을 각각 SDS-PAGE후, Immunoblotting을 진행하였다. 5번~12번 라인은 Cdc53에 붙여진 Flag 부분과 결합 할 수 있는 M2 anti-Flagresin 하에서 면역 침강(immunoprecipitants)을 진행 후, 1번~4번 라인과 같은 방법으로 Immunoblotting 했다.

- 실험 결과 관찰 및 해석
1번 라인은 두 단백질 모두 발현하지 않고, 2번 라인은 AtTIR1 단백질만 발현하며, 3번 라인은 CDC53 단백질만 발현하며 4번 라인은 두 단백질 모두 발현함을 알 수 있다. 이로부터 4개의 효모 Strain이 각각의 단백질을 매우 선택적으로 발현하고 있다는 것을 알 수 있다. 라인5번~라인8번에서 Cdc53은 Resin과 결합 하고 있기 때문에, 용액 속에 녹아져 나온 AtTIR1만 관찰이 되었다. 라인1번~라인4번과 비교해 보면 Resin이 Cdc53에 대해서 매우 특이적으로 결합하고 있다는 사실을 확인 할 수 있다. 라인11번과 라인 12번을 비교해 볼 때, 라인 11번에는 없었던 AtTIR1 단백질이 라인12번에서 관찰 되었다.

참고 자료

없음