Plasmid Vector 추출 레포트

목차

1. Title
2. Object
3. Introduction
4. Materials
5. Methods
6. Results
7. Discussion
8. Reference

본문내용

Object
다양한 vector의 종류 및 쓰임, 추출방법을 익히고, plasmid 추출 kit를 이용하여 직접 plasmid를 추출해본다.

Introduction
1. Alkaline Lysis 원리
높은 pH의 Alkaline 용액 상태에서 염색체 DNA와 plasmid DNA의 크기 및 topology에 의해 염색체 DNA와 혼합된 상태로부터 plasmid DNA만 분리한다. Alkaline 상태의 Anionic detergent 용액에서 detergent에 의해 세포가 용해된 후 염색체 DNA 와 plasmid DNA 모두 Alkaline 용액에 노출되면 두 형태의 DNA는 모두 변성된다. 이후 산성용액을 혼합하면 염색체 DNA는 크기가 너무 커서 변성 전 정상적인 Topology로 복원되지 못하고 더욱 엉기는 반면 Plasmid DNA는 크기가 작기 때문에 정상적으로 복원된다. 이때 원심분리를 이용해 엉긴 염색체 DNA는 세포 찌꺼기 및 변성된 단백질과 함께 침전물로 갈아앉고 plasmid DNA는 용액에 녹아 염색체 DNA와 구분되어 분리된다.

참고 자료

구글, " Alkaline Lysis 원리“
구글, “miniprep 전기영동 결과“
구글, 플라스미드 선정 조건