[분자생물학실험 A+ 레포트] Gene cloning & PCR 실험 보고서

소개글

분자생물학실험 과목에서 작성한 실험보고서로 gene cloning, pcr 실험한 결과보고서 입니다.

목차

1. 서론
2. 결과
3. 고찰
4. 참고문헌

본문내용

1. 서론
gene cloning은 우리가 원하는 DNA 절편을 restriction enzyme으로 절단하여 특정 vector를 사용해서 ligation 한 후, 대장균과 같은 숙주세포에 transformation 시키고, 이 세포를 증식시켜 충분한 양의 DNA를 얻는 것이 목적이다. 실험은 총 5주에 걸쳐서 이루어졌으며 ligation 단계까지의 실험원리를 figure 1에 도식화하였다. 이때 vector에 유전자가 들어있으므로 성공적으로 ligation이 됐다면 Amp이 포함된 배지에 도말했을 때 colony가 잘 자라게 된다. 이어지는 실험으로 miniprep을 통해 colony로부터 plasmid DNA를 분리하고 PCR을 통해 DNA를 분석할 수 있다.

<중 략>

3. 고찰
이번 분자생물학 실험은 5주 동안 gene cloning과 PCR을 하였는데, 기간도 길었던 만큼 매주 실험을 진행하면서 다음 실험 결과에 영향을 끼칠 수 있는 요인들이 많아서 각 실험 별로 중요한 요인들에 대해 고찰해보았다. 먼저 restriction enzyme digestion을 할 때 두 개의 enzyme이 동시에 작동이 안 되면 self ligation이 일어날 수 있다. 이를 방지하기 위해 넣어준 CIP는 restriction enzyme에 의해 절단된 vector의 phosphate group을 제거하는 중요한 역할을 한다. 그렇다면 왜 insert가 아니라 vector에만 넣어줬을까? 그 이유는 먼저, insert에서는 800bp를 필요로 하고 3969bp를 버리기 때문에 self ligation이 된다면 크기 차이가 확연하게 나서 self ligation 발생 여부를 쉽게 알아낼 수 있다. 또, insert가 들어있었던 vector의 경우 유전자가 아니라 을 갖기 때문에 CIP 처리를 안 해줘도 결국 Amp이 들어있는 배양액에서는 자랄 수 없다.

참고 자료

NEB, “star activity”, http://www.neb.com/nebecomm/tech_reference/restriction_enzymes/star_activity.asp
위키백과, “transformation efficiency”, https://en.wikipedia.org/wiki/Transformation_efficiency