Protein Quanitification by Bradford protein assay

목차

1. Introduction
2. Materials & Methods
3. Results
4. Discussion & Conclusion
5. Reference

본문내용

Abstract
3개 sample의 단백질의 농도를 결정하고, 이를 전기영동 및 Commassie blue staining 방법을 이용하여 단백질의 양이 제대로 검출되었는지 확인한다.

1. Introduction
① Bradford protein assay :　Bradford protein assay는 염색약 쿠마시블루 G-250 (Coomassie brilliant blue G-250, CBBG)의 흡광도 차이를 이용한 실험 기법이다. 쿠마시블루는 세 가지 상태가 존재한다. 산성 조건에서 붉은색을 띠고 465nm에서 흡광도 피크가 나타나며 중성 조건에서는 초록색, 염기성 조건에서는 파란색을 띠며 595nm에서 흡광도 피크가 나타난다. 595nm의 빛에 대한 시료-시약 혼탁 액의 흡광도를 비교하면 시료에 존재하는 단백질의 양을 정량적으로 구할 수 있다.
② SDS-PAGE : SDS-PAGE는 샘플 속의 단백질들을 분자량에 따라 각각 밴드 형태로 분리하는 실험법으로 단백질의 수, 각 단백질의 양, 크기 등을 알 수 있다.

<중 략>

4. Discussion & Conclusion
첫 번째 실험에서 구한 R2값이 0.7715로 직선과는 다소 차이가 났다. Standard soluiton을 reverse-pipetting 하는 과정에서 suction이 제대로 이루어지지 않았거나 용액을 well에 옮기는 과정에서 오차가 발생했음을 생각해볼 수 있다.
두 번째 실험으로 SDS-PAGE를 통해 단백질 시료의 농도를 구하고, 분자량을 예측할 수 있다. 첫 번째 실험에서 구한 sample의 농도와 비교해 보았을 때 꽤나 큰 차이가 났다. 이렇게 차이가 나는 이유로는 첫째, 첫 번째 실험에서 구한 sample의 농도가 정확하지 않기 때문이다. 그리고 둘째, 항온조에서 가열한 후 생긴 증기로 인해 발생한 loss와 well에 loading시에 발생한 오차를 생각할 수 있다.

참고 자료

김승호,장규태 단백질 실험노트, 월드사이언스 2006
윤경식, 김호식 외 역. 레닌저 생화학(상) 제 7판, 2018