[생명공학] 기본적인 DNA manipulation 실험 방법들

목차

1.DNA miniprep

2.Agarose Gel 만들기

3.DNA 확인

4.PCR (polymerase chain reaction)

5.PCR product purification (수작업시)

6.Protein purification

7.Transformation

본문내용

Transformation (using heat shock method)
ⓐ -80℃에서 보관한 competent cell을 ice에서 2~3min 넣어 녹임.
ⓑ clean bench에서 competent cell 100㎕을 따서 plasmid(vector) 10㎕에 넣고 tapping하고 ice에서 40min 대기.
⇒ competent cell : plasmid = 10 : 1. 이보다 클 경우 효율 낮아짐.plasmid가 competent cell membrane에 붙어 있음.
ⓒ 42℃에서 1min 30sec 동안 heat shock.
ⓓ 1min간 ice에서 안정화시킴.
ⓔ clean bench에서 LB배지 800㎕ 넣고 37℃ shake incubator에서 45min 동안 배양
⇒ 나중에 antibiotics를 이용하여 transformation 된 cell을 찾음.
이를 위해 먼저 cell이 건강하게 자라도록 antibiotics가 없는 LB배지에서 기름.
ⓕ centrifugation 3000rpm 5min 한 후 pellet 부분 supernatant 포함하여 100㎕ 정도만 남기고 나머지 버림.
⇒ antibiotics가 깔려 있는 plate 배지에 spreading 했을 때 잘 흡수되도록 필요

참고 자료

없음