[A+] 서강대 현대생물학실험1 항체 생산

소개글

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목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Materials and Methods
4. Result
5. Discussion
6. Reference

본문내용

항체는 Western blot, immunoprecipitation 등 여러 실험 기법에 응용되므로, 특정 항원에 대한 항체를 얻어내는 것은 매우 중요하다. 본 실험은 mouse로부터 eGFP의 접종으로 면역반응을 일으켜 항체를 얻으며, 그 과정에서 항원 주사법과 채혈법을 익히는 것을 목표로 하였다. 더 나아가, 얻은 항체를 이용하여 특정 단백질만을 검출하는 방법인 Western blot을 시행해보며, 이를 Coomassie staining 방법과 비교해보는 것도 두 번째 목표로 삼았다. 본 실험에서는 mouse(BALB/c, 5주령)에 0.50 ml/mg eGFP와 Freund’s adjuvant의 1:1 mixture를 일주일 간격으로 150 ul씩 총 3차례 복강주사하여 mouse에 eGFP에 대한 항체를 형성시켰으며(첫 접종 시는 complete Freund’s adjuvant, 두 번째 접종부터는 incomplete Freund’s adjuvant), 4주차에 CO2 gas로 mouse를 안락사 시키고 심장에서 혈액을 채취하여 eGFP에 대한 항체가 들어있는 혈장을 얻어내었다. eGFP 정제과정에서 얻었던 Induction 전, 후, Flow Through, Wash 1, 2 sample에 더해 1x, 1/2x, 1/5x, 1/10x eGFP sample을 SDS-PAGE하여 하나의 gel에는 eGFP 항체를 1차 항체로 이용하여 Western blot을 시행하였으며, 다른 gel에 대해서는 Coomassie staining을 진행하였다. Western blot에서 eGFP만이 특이적으로 잘 검출되었으므로, mouse로부터 얻은 항체가 eGFP에 특이적으로 잘 결합하였다고 볼 수 있다. 또한, Coomassie staining에서는 eGFP외의 다른 물질도 함께 검출되었으며, Western blot과 Coomassie staining 결과를 고려했을 때 eGFP의 정제도 잘 이루어진 것으로 평가되었다.

참고 자료

Campbell, Urry, Cain, Wasserman, Minorsky, Reece(2019), 캠벨 생명과학, 11th Edition, ㈜바이오사이언스출판, pp.1066-1076.
De Moreno, M. R., Smith, J. F., Smith, R. V.(1986), Mechanism Studies of Coomassie Blue and Silver Staining of Proteins, Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol. 70, Issue 9, pp. 907-911.
https://www.nordicbiosite.com/product/OPBI00003-0.1/EGFP-Protein (accessed 2021-06-22)
M. Leenaars, M. A. Koedam, C. F. Hendriksen, E. Claassen(1998), Immune responses and side effects of five different oil-based adjuvants in mice, Veterinary Immunology and Immunopathology, Vol. 61, pp. 291-304.
참고자료: 현대생물학실험1 조교 강의 ppt와 교수님 강의 ppt