[생물학]pcr & rt-pcr

소개글

pcr과 rt- pcr 조사

목차

PCR
1.원리
2.PCR반응 조성물
3.PCR싸이클의 조성
4.PCR의 응용분야

rt-PCR
1.원리
2.과정

본문내용

중합효소연쇄반응(Polymerase chain Reaction : PCR)

Ⅰ.원리

PCR의 원리는 빠른 시간내에 반복하여 DNA를 복제하는 것이다. 즉, PCR은 시험관 내에서 핵산을 여러차례 반복하여 복제함으로써 특정 핵산 부위를 증폭하는 방법이다. 다만 PCR이 DNA 복제과정과 약간의 차이가 있다면, DNA 복제과정에서는 이중 가닥의 DNA를 단가닥으로 만드는 과정에 효소인 헬리카아제가 사용되는 반면, PCR에서는 높은 온도를 이용해 이중가닥의 DNA를 단일가닥으로 변성한다는 점이다. 또한 DNA 합성에 반드시 필요한 RNA 프라이머 대신 PCR에서는 합성된 올리고뉴클레오티드가 사용된다. 또한 DNA 복제에서는 DNA 전체 부위가 복제되는 반면, PCR에서는 증폭을 원하는 DNA 표적 부위의 주형 DNA에 올리고뉴클레오티드 프라이머가 결합하도록 디자인하면 주형 DNA 중에서 DNA 합성이 일어났으면 하는 DNA 부분만을 합성할 수 있게 된다. 따라서 프라이머의 선택과 프라이머가 원하는 부위에 붙는 과정이 원하는 DNA 부위 합성에 가장 중요하다고 할 수 있다.
프라이머가 주형 DNA에 붙고 나면 DNA중합효소가 프라이머의 3‘ 끝에 주형가닥과 상보적인 뉴클레오티드를 연결해 붙임으로써 중합과정이 일어난다. 이는 PCR과 DNA 복제과정에서 공통된 과정이라 할 수 있다. 따라서, PCR 반응은 주형 DNA의 변성과정에 필요한 열가열과정, 프라이머가 주형에 붙을 수 있는 프라이머 결합과정, DNA 중합효소가 프라이머의 뒤를 이어 뉴클레오티드를 중합해 넣는 사슬연장과정으로 이루어져 있으며 이와 같은 과정을 반복함에 따라 한 개의 표적 DNA가 두 개로 이어 다시 2개의 DNA가 4개로, 4개가 8개로 증폭되는 DNA 증폭이 이루어진다.
이와 같은 반응을 35회 시행하게 되면 처음 존재하던 표적 핵산부위의 235 에 해당하는 DNA가 증폭된다. 따라서 PCR은 검체 내에 존재하는 매우 적은 양의 표적 핵산부위를 검출하는 데 매우 적절한, 민감도가 높은 분자생물학적 방법이다.

참고 자료

최신 진단분자생물학실습(한국임상병리학과 분자생물학 교수회 저)
청구문화사