protein lysis & bradford assay

소개글

protein lysis & bradford assay
cancer cell인 huh-7에서 protein을 추출하고 bradford assay를 이용해
그 농도를 구해본다.

목차

1. Date
4. Topic
5. Purpose
6. Materials
7. Method
8. Results
9. Discussion
10. Reference

본문내용

5. Purpose Cancer cell을 lysis하여 protein을 얻는다.
Cancer cell protein의 농도를 측정하여 본다.
6. Materials lysis ; lysis buffer, Trypsin EDTA, PBS, tube, pipette, scraper
bradford ; protein, BSA, tube, pipette, 96well, spectrophotometer, Bradford dye

3. Protocol
① 위의 조성대로 Lysis buffer를 만든다.
② Media를 제거하고 PBS로 1번 washing한다.
③ Dish에 PBS 1ml을 넣고 scraper로 세포를 긁어낸다.
④ Cell suspension을 tube로 옮긴다.
⑤ Centrifugation.(13000rpm, 4℃, 10min)
⑥ 상층액(PBS)을 제거한다.
⑦ Lysis buffer 200ul를 넣고 vortex후 ice에 20min간 incubation.
⑧ Centrifugation. (13000rpm, 4℃, 10min)
⑨ 상층액만 따서 -70℃에 보관.

* Bradford
① Bradford dye를 4℃에서 RT로 실험 직전에 온도를 바꾼다(dye파괴 방지)
② Spectrophotomerer를 미리 예열해둔다.
③ BSA농도 간격을 정하고 사용할 BSA의 농도에 맞게 volume을 정한다.

참고 자료

- http://ref.daum.net/item/11210490
- http://search.daum.net/search?w=tot&q=bradford%20%B9%FD&ni-
l_profile=jockeybottom