2주차_pipetting, 50X TAE buffer preparation

목차

1. Purpose
2. Theory
3. Apparatus/reagent
4. Procedure
5. Data&Results
6. Discussion
7. Reference

본문내용

Purpose: pipette 사용법을 익힌다. 50X TAE buffer를 만들고, 그 용도를 안다.

Theory
1. Pipetting 사용법 및 주의사항
Pipette은 액체 시료를 옮길 때 사용하는 실험기구로, 일체형으로 구성된 유리 피펫부터 전자 피펫까지 그 종류가 매우 다양하다. 종류에 따라서 각기 다른 정확도와 정밀도를 가진다.
피펫은 부분적으로 진공을 만들고, 선택적으로 진공을 풀 때 액체가 끌려오는 현상을 이용한다. 그 중 micro pipette의 경우 1~1000 μL 범위에 해당하는 액체를 옮길 때 사용하며, 세부적으로 P10, P20, P200, P1000 등으로 구분할 수 있다. 마이크로 피펫의 종류에 따라 취할 수 있는 액체의 부피는 다음과 같다.

Pipette의 구조는 다음과 같다. 피펫의 가장 위쪽에 있는 버튼(plunger)은 액체를 흡입하거나 방출할 때 누른다. 이 버튼은 두 번의 멈춤 지점이 있다. 또한, volume adjustment knob로써 수평 방향으로 돌아가며, 한 번에 옮길 액체의 양을 조절할 때 사용한다. 피펫을 사용해서 용액을 옮길 때는 가장 먼저 원하는 부피를 옮길 수 있는 적절한 피펫을 골라야 한다. 그리고, 용량을 조절한 후 피펫에 맞는 멸균 피펫 팁을 꽂아야 한다. 일반적인 시료를 옮길 때 팁이 꽂힌 피펫을 1st stop(가장 먼저 멈추는 지점, 얕은 멈춤 지점)까지 누른다. 그리고 그 상태로 액체 시료에 팁을 넣고, 손가락을 떼면 plunger가 원상태로 돌아온다. 이 과정에서 피펫은 액체 시료를 원하는 부피만큼 취한다. 시료를 옮길 때는 plunger를 1st stop까지 눌러서 시료를 옮긴 후, 2nd stop까지 눌러서 피펫 팁에 액체가 남지 않도록 완전히 옮겨야 한다.

참고 자료

Daniel C Harris. 분석화학. 자유아카데미. 2021. 10판 pp263-290, pp.221~230, pp73-90