protein preparation

소개글

protein preparation

목차

1.Buffer의 정의 및 Buffering effect
Tris buffer의 제조

2. cell lysis
1. Alkaline lysis miniprep
2. Boiling miniprep

protein extraction
1. 분획법(fractionation)
2. 투석법(dialysis)
3. 관 크로마토 그래피(column chromatography)
4. 전기영동(electrophoresis)

protein concentration (ammonium sulfate precipitation) = salting out

centrifugation

dialysis

참고문헌

본문내용

Buffer의 정의 및 Buffering effect
Buffering solution은 적은 양의 산이나 염기를 첨가하거나 희석시킬 경우, 용액의 H+와 OH-의 농도 변화를 줄이기 위해 사용되는 용액이다.
Buffering solution은 약산과 그것의 짝염기로 이루어진 것이 일반적이며, 약염기와 그것의 짝산으로 이루어진 경우 전자보다 적다.
용액의 PH변화에 저항하는 Buffering solution의 기능은 약산과 그 짝염기의 평형에 의한 결과로, Le Chatelier의 공통이온효과에 의해 설명된다.
HA(aq) + H2O(l) ----> H2O(aq) + A-(aq)
만약 위의 용액에 염기를 첨가하면, 염기는 곧 산-염기 중화반응을 통해 H3O+를 제거하고, 평형반응에 의해 위의 반응은 정반응이 진행되어 원래의 PH를 유지하게 된다.
마찬가지로, 위 용액에 강산을 첨가하면, 짝염기 A-와 protonated 되어 역반응이 진행되므로 원래의 PH가 유지될 수 있다.

Tris buffer
pKa=8.6으로서 세포의 pH가 7.5~8.0 사이에서 사용할 수 있는 장점이 있다.
게다가 가격이 다른 것에 비하여 매우 싸기 때문에 tris-buffer를 이용한다.
단점은 pH 7이하인 경우 buffer의 능력이 떨어지게 되고 pH의 값이 온도에 따라 변한다.
Tris를 녹여 HCl로 pH를 맞추면 Tris-HCl (혹은 Tris-Cl)
Tris를 녹여 acetic acid로 pH를 맞추면 Tris-acetate라고 한다.
예를들어, PH 5.0의 0.2M Tris-acetate buffer 500ml를 제조한다고 하면
Heraderson - Hasselbalch 방정식을 써서
PH = Pka + log[OAc-]/[HOAc]
acetic의 k 값은 1.70 X 10의 -5승 , pka = 4.77

참고 자료

사진: 구글 이미지 검색
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