(생화학실험)면역발색법 (Western blot)

소개글

면역발색법 (Western blot)

목차

4. 면역발색법 (Western blot)
- 근원세포의 분화과정에서 creatin kinase의 발현비교
실험목적
실험결과
토의

본문내용

4. 면역발색법 (Western blot)
- 근원세포의 분화과정에서 creatin kinase의 발현비교
실험목적
1. 세포나 조직 내의 특정 단백질의 발현 양을 알아보는 면역 발색법 (western blot 또는 immunoblot) 에 대하여 알아본다.
2. 배양 근원 세포의 분화에 따라 creatin kinase, actin 의 발현이 어떻게 달라지는지 알아본다.

실험결과
1. 면역 발색 결과를 첨부하고 결과를 분석하시오.
- MB와 MT의 단백질을 정제해 전기영동 시킨 gel을 PVDF membrane에 transfer시킨 후, western blot법을 이용해 CK와 actin의 발현을 확인했다. CK는 MT에서만 발현되었고, actin은 MB와 MT 둘 다 발현되었다.
2. Transfer를 한 후 transger가 잘 되었는지 확인 할 수 있는 방법에 대해 서술하시오.
- Transfer가 끝난 후 membrane을 물기가 없을 정도로 살짝 말려서 membrane의 후면을 TBST에 띄우면 단백질 band가 보이는 것으로 Transfer가 잘 되었는지 확인할 수 있다. 또 pre-stained marker를 사용하거나 transfer한 gel을 염색, membrane을 Ponceau S로 염색하여 확인한다.1
3. 면역발색 결과 여러 band가 나왔다. 우리가 검출하기 위해 사용했던 항체가 인식하는 단백질과 다른 크기의 band는 어떻게 설명할 수 있을까? 또, 이것을 줄일 수 있는 방법에 대해 설명하시오.
- 시료준비과정에서 단백질이 제대로 정제되지 않았을 수 있다. 이렇게 되면 표적단백질과 유사한 단백질이 남아 거기에 항체가 결합하여 band 를 형성할 수 있다

참고 자료

실험서, 2010년, 아주대학교 생화학실험실, 6쪽
단백질 실험노트, 2001년, 김승호 역, 24쪽
단백질 실험 핸드북, 2007년, 강호일 역, 152~157쪽
분자세포생물학, 1998년, 박상대 등 저, 15쪽
김혜선 , 2003년, 근원세포의 분화 과정과 듀센 근위축병에서의 focal adhesion molecules의 작용(연구보고서) , 6쪽 / 출처 : 국가과학기술정보센터 NDSL, http://www.ndsl.kr/index.do