생화학실험 sds page 2

소개글

실험레포트입니다.

목차

1. 실험제목 : SDS PAGE
2. 실험날짜 : 2009. 11. 02. 월요일
3 Data & Result
4. Discussion

본문내용

이번 실험의 경우 SDS PAGE를 이용하여 몇 개의 sample을 loading시켜 그 이미지를 coomassie staining통해 이미지를 얻고, 다음 실험인 Western blotting을 위하여 PDVF membrane으로 electrotransfer한 후 그 filter를 보관하는 것이였다.
이번 실험에서 주의해야할 사항으로는 먼저 seperation gel을 만드는데 있었다. 이 과정에서 유리를 맞붙여 cast에 끼워 넣은후 우리가 만든 gel을 붓는과정이 있었는데 이 과정에서 두 가지의 실험과정에서의 어려움을 볼 수 있었다. 정확하게 연결이 되지 않은 경우 cast에서 gel 용액이 흘러 내려 실패한 경우가 있었고 gel이 굳지 않아서 다시 gel을 만들어야 하는 경우가 있었다. 우리의 경우 gel이 흘러내리지는 않았지만 굳히는 과정에서 시간이 오래걸려 조금 애를 먹었다. 아마 ammonium persulfate를 마지막에 넣어야 하는데 미리 넣어서 그렇거나 아니면 충분한 양의 sample을 넣지 않아 굳는데 시간이 걸린것 같다. 이후 전기영동을 위하여 Bio-Rad, Mini-PROTEIN Teta Cell System을 조립하는 과정이 있었는데 이 경우에 유리판을 2개 끼우는 것이 있었다. 이 두 개의 유리판 사이에 running buffer를 채우게 되는데 gel에 running buffer가 들어갈 수 있도록 낮은 유리판 쪽을 running buffer와 맞닿은 면에 두고 다른 유리판은 running buffer가 들어가지 않는 방향으로 끼워넣어 전기영동을 시킨다. 마지막으로 우리가 두 가지 실험을 위한 전기영동을 시키다 보니 serum부분과 cell lysate부분을 동시에 하게 된다. 이 때 이 부분을 헷갈리지 않고 잘 기억해야한다. 전기영동이후 꺼낼때나 이후 gel을 유리판에서 분리할 때 헷갈릴 수 있으니 주의해야 한다.
다음으로 이번 실험에서의 point를 살펴보겠다. 먼저 왜 SDS PAGE에서는 다양한 전하와 크기를 가진 단백질이 존재함에도 크기에 따라서만 분리되는 것일까? 그 이유는 먼저 SDS가 들어가는 이유를

참고 자료

없음