IF staining

목차

1. The principle of Immunofluorescence Assay
2. Principle of Fluorescence
3. Fluorescent materials give off light because of their atomic structure.
4. The practical procedure of Immunofuorescence
5. 검체의 고정 및 전처리
6. Formaldehyde / Paraformaldehyde
7. Immunofuorescence 시약
8. Immunofuorescence Method

본문내용

In IF techniques, antibodies are chemically conjugated to fluorescent dyes such as fluorescein isothiocyanate (FITC) or tetramethyl rhodamine
isothiocyanate (TRITC).

These labeled antibodies bind (directly or indirectly) to the antigen of interest which allows for antigen detection through fluorescence techniques.

This technique based on pioneering work by Coons and Kaplan and later by Mary Osborne.

Direct
- 표본 내에 존재하는 물질 A에 대한 Primary Antibody를 표본 반응시키면 Antibody는 Antigen A와 반응한다.
- 표본 내에 Antigen- Antibody 결합체가 생겨도 Antibody는 일종의 immunoglobulin 때문에 현미경에서의 관찰이 곤란하다. 
- 어떤 종류의 물질을 Antibody 에 표지 하여 Antigen- Antibody 반응을 시켜서 Antigen 의 detection 부위를 확인할 수 있도록 해야 한다.
- 표지물질의 대표적인 것은 Fluorescent dyes와 peroxidase등의 효소이다.

<중 략>

NOTE: 모든 단계는 RT에서 수행된다.

1. Seeding한 Sample을 준비한다.
2. Sample을 PBS로 2번 washing한다.
3. 유리알을 plate에 넣고 Fixation buffer를 넣고 15min 동안 fixation한다.
4. Fixation이 끝나면 PBS+0.1% Triton X-100+0.5%BSA로 5min 씩 3번 washing한다.

참고 자료

없음