SDS-PAGE 결과보고서

목차

1. 요약
2. 서론
3. 실험방법
4. 결과
5. 토의
6. 결론

본문내용

요약 : SDS-PAGE (sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis)는 계면활성제인 SDS로 단백질을 하전 시킨다음 전압을 걸어주어 망상구조를 거치게끔 하는 방법이다. 이렇게 하면, 단백질 본래의 정전기적 성질에는 상관없이 분자의 크기에 의해서만 분석할 수 있다. 전기영동법에는 여러가지 종류가 있지만 그중에서도 SDS-PAGE가 널리 쓰이고 있는 것은 많은 용적의 시료를 loading하더라도 좋은 해상도를 얻을 수 있다는 특성에 있다.
우선sample buffer 15μ, sample 15μ를 mix하고 단백질의 subunit이 완전히 다 분해되게 하기 위해 100 에서 5분동안 heating한다. 이 과정은 active staining 할 때나 열에 민감한 sample의 경우 생략한다. 그 후에 gel을 washing한 후 전기영동 기기에 running buffer를 채우고 시료를 채운다. loading을 하면 단백질의 분자량에 따라서 이동한다. 분자량이 작은 단백질 일수록 젤의 아래쪽 가까이에서 볼 수 있다.

<중 략>

Stacking gel의 역할은 Glycine 이온은 net charge가 0이 되는 pI 값이 6.2인데 starcking gel의 경우 pH가 6.8 이므로 이로 인해 Cl-와 glycine간의 이동속도의 차이가 생기게 된다. 따라서 이동속도는 Cl->단백질>glycine 순서가 된다. Stacking gel 상에서 Cl-와 glycine간의 이동속도 차이는 두 이온 사이에서 발생하는 high voltage gradient의 영향을 받는다. 전기영동으로 인한 전기장뿐만 아니라 이 두 이온 사이의 전기장이 또 한번 생김으로 인해 두 이온 사이에 놓인 단백질들은 그 이동속도가 매우 빨라지게 되어 분자량의 차이에 의한 이동속도의 차이가 거의 없게 된다. 또한 acrylamide의 농도도 낮기 때문에 단백질들은 거의 동일한 속도로 내려간다. 이로 인해 단백질들은 일직선으로 내려가게 되고 running gel에 들어가기 전에 같은 출발선상에 위치하게 된다.

참고 자료

없음