제한효소 처리 및 전기영동 예비보고서

목차

1. 실험목적
2. 실험방법
3. 실험이론
4. 참고문헌
5. 추가질문

본문내용

1. 실험목적
E.coli의 재조합 plasmid DNA를 분리하고 제한효소를 처리한 후 전기영동을 통해 DNA band를 확인한다.

2. 실험방법
(1) 지난주에 추출한 DNA를 이용한다.
(2) 제한효소는 점성이 있으므로 DNA를 제외한 시약들을 mixture로 만들어서 사용.
(3) 37℃에서 한 시간 동안 반응 후 전기 영동한다.

3. 실험이론
(1) 전기영동
콜로이드입자(colloid)-입자의 크기가 2.0에서 1000nm-는 전기를 띠고 있는데, 이 때문에 콜로이드 용액 속에 전극을 넣고 직류 전압을 가했을 때 콜로이드 입자가 어느 한쪽의 전극을 향해서 이동하는 현상이 나타난다. 보통 전기 크로마토그래피라고 하기도 한다. 예를 들면 수산화철이나 수산화알루미늄 등 콜로이드 입자는 음극 쪽으로 이동하고, 황·금·은 등 금속 콜로이드나 황화물·규산 등이 분산된 콜로이드 용액에서는 입자가 양극 쪽으로 이동한다. 입자의 이동속도는 입자 계면의 전기운동학적인 전위 차이에 의해서 변하며, 전해질이 흡착하면 이 전위차의 크기가 변하므로 용액 속 전해질의 농도나 종류에 의해서 영향을 받는다. 또 입자 크기와 형태에 따라서도 변한다. 따라서 콜로이드 입자의 각종 성질이 같다고 해도 어느 하나가 다르면 전기이동으로 입자를 분리할 수가 있다. 이와 같은 방법을 이용하면 여러 분석을 할 수 있지만, 특히 단백질 분석을 하는 데 있어서 중요하다.

(2) 전기영동의 종류와 원리
① 이동계면 전기영동법 (Moving boundary electrophoresis)
분리하고자 하는 분자들이 용액 내에 산재해 있는 상태에서 전류를 통하여 용매와 용액사이 또는 용액과 용액사이에 계면을 이루게 하는 전기영동법이다. 전위 경사를 제공하기 위해 관의 양끝에 위치하는 두 개의 전극과 완충액으로 채워진 U자 관을 사용한다. 시료를 U자 관의 바닥에 넣고 따듯한 공기에 의한 영향을 줄이기 위하여 낮은 온도(4℃)에서 전기영동을 실시한다.

참고 자료

Garrett R.H & Grisham C.M/ 생화학 3판/ 라이프사이언스/ 2006
김영희/ 분자생물학실험서/ 월드사이언스/ 2008
생물화학공학/ 주식회사 서울외국서적/ James E. Bailey, David F. Ollis
생물공학/ 유한문화사/ 고정삼외5명/ 2003