[생물화학공학실험]Enzyme activity assay

소개글

"[생물화학공학실험]Enzyme activity assay"에 대한 내용입니다.

목차

1. Abstract
2. Experiment
3. Results & Discussion
4. Conclusion
5. Reference

본문내용

1. Abstract
효소는 생체 내에 존재하는 단백질로 이루어진 촉매이다. 반응에 필요한 활성화 에너지를 낮추어 보다 낮은 에너지 상태에서 반응이 쉽게 일어날 수 있도록 도와준다. 이러한 효소는 종류와 조건에 따라 반응이 일어나는 효소의 활성도가 다르므로 효소의 활성이 측정될 필요가 있다.. 효소의 활성 측정은 다양한 방법이 존재하지만, 이번 실험에서는 UV spectrophotometer를 통해서 효소의 활성을 측정한다. 실험은 10분이라는 일정 간격 동안 반응을 시키고, 흡광도를 측정한 후 Lambert-beer law를 통하여 농도를 계산하여 효소 활성도를 계산한다.
Abs-Time선도는 선형적으로 나와야 실험이 잘 진행되었다고 볼 수 있으며, Fig 6의 그래프의 R^2 값이 0.9665인 것을 통해서 실험적 오차가 존재했을 것으로 보았다. 실험적 오차로는 1) Sampling 과정을 통한 용액의 부피 변화, 2) 반응시간, 3) Esterification으로 보았다.

2. Experiment
1) 기구 및 시약
(1) Candida antarctica lipase B solution (CalB)
이번 실험에서 사용하는 활성을 측정할 효소로, 지방분해 효소(lipase)의 일종이다. CalB는 ester기의 가수분해 반응을 유도하여 지방을 지방산과 Glycerol로 분해한다. CalB는 이번실험에서 p-nitrophenyl butyrate를 가수분해하여 노란 빛을 띄는 p-nitrophenol과 butyric acid를 생성한다.

<중 략>

2) 실험방법
(1) 호일을 감싼 bottle12개를 준비하여 각 botle에 54.45ml의 50mM Tris-HCl buffer를 넣는다.

(2) 0.55ml의 50mM p-NPB를 bottle에 넣어 55ml의 0.5mM p-NPB 용액을 만든다.

(3) Bottle에 500배 희석한 효소(CalB)를 20μl 넣어준다.

참고 자료

Gray D. Christian 외 2인. “ANALYTICAL CHEMISTRY 7th”. WILEY(2015). P474-477
실험노트