Restriction 결과레포트 [A+]

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"Restriction 결과레포트"에 대한 내용입니다.

목차

1. Abstract
2. Experiment
3. Result
4. Discussion
5. Reference

본문내용

1. Abstract
Restriction of DNA는 제한효소 3가지, Xho I, EcoR I, Nde I를 이용하여 plasmid DNA를 절단하는 실험이다. 제한효소란, DNA의 특정 염기 서열을 인식하여 제한자리에서 특이적으로 DNA를 절단하는 효소로, 제한효소의 종류에 따라 DNA를 절단하는 부위가 다른 점을 이용하여 실험결과를 확인한다.
각 제한효소 Xho I, EcoR I, Nde I는 각각 제한자리 location 158. 192, 288에서 plasmid DNA를 절단하며, 세 가지의 제한효소를 모두 사용하면 총 8kbp의 plasmid DNA가 1.7, 0.8, 5.5kbp의 3조각으로 나누어진다. 이후 절단된 DNA를 아가로스 겔 전기영동하고 UV transilluminator를 통해 결과 확인하였다. 실제 실험은 제한효소 세 가지를 한택1, 택2하여 나올 수 있는 여섯 가지 경우의 수로 plasmid DNA를 절단하여 결과를 확인하였다.

2. Experiment
(1) 기구 및 시약

PCR tube
Micropipette
Incubator
Electrophoresis apparatus
Electrophoresis agarose
UV transilluminator
표 1. 실험 기구

-plasmid
-10X H buffer
-DDW
-Restriction Enzyme (Nde I, Xho I, EcoR I)
-DNA ladder
-DNA loading star (6X)
-1x TAE buffer (Tris+Acetate+EDTA)

<중 략>

 제한효소를 채취할 때, 계면에서 뜨는 이유?
→ 제한효소의 주입량의 경우, 1μl로 굉장히 적은 양이다. 따라서 피펫 팁에 묻게 되는 효소를 줄이는 등 오차를 최소화하기 위하여 계면에서 제한효소를 뜨게 된다.
제한효소가 기질 DNA에 대해 과잉으로 존재하면, 스타활성(Star activity)이 일어나게 된다. 스타활성이란, 제한효소가 본래의 특정 절단 부위 이외에 DNA의 다른 부위를 절단하는 활성이다. 즉, 제한효소의 DNA 절단 특이성이 변성되거나 완화되어 비정상적인 부위를 인식하여 DNA 절단하거나, 완전히 특이성을 잃는 경우이다.

참고 자료

00_pET-22b(+)
00_학부실험용+유전자서열
Khan Academy/Restriction enzymes & DNA ligase