[생명과학]Western blot 과 크로마토그래피

소개글

생명과학, 의학을 전공하는 학생들에게 유용한 자료입니다.

목차

1. Western Blot
(1) SDS-PAGE of protein
(2) Electrotransfer
(3) Immunodetection
Note
2.단백질의 분리
실험방법
- 이온교환 크로마토그래피(Ion exchange chromatography)

3. 크로마토그래피
(1) 겔 크로마토그래피(Gel filtration chromatography)
(2) 친화 크로마토그래피
(3) 기타 방법
Note

본문내용

1. Western Blot
"Western Blot"은 다양한 단백질들이 포함되어 있는 세포(혹은 조직)의 혼합물로부터 특정한 단백질을 찾아내는 방법으로 “immunoblot"이라고도 한다. 적당한 membrane에 transfer된 단백질의 antigenic epitope과 반응하는 antibody를 이용하여 항원-항체 반응을 일으킴으로써 특정 단백질의 존재 여부 및 단백질의 양을 비교할 수 있는 기법이다.
여러 단백질이 포함된 시료를 sodium dodecyl sulfate(SDS)와 같은 detergent, DTT 혹은 beta-mercaptoethanol과 같은 환원제가 포함된 버퍼에 용해시킨 후 SDS-polyacrylamide gel에 전기영동(SDS-PAGE)하여 단백질의 크기별로 분리한 후 nitrocellulose, polyvinyl difluoride(PVDF) 또는 nylon 등의 membrane에 옮긴 후 (이 과정을 western blot 또는 western transfer라고 한다) 단백질이 옮겨진 membrane에서 항원-항체 반응을 이용 특정 항체에 대해 반응하는 단백질을 찾아내는 방법이다. 대부분 SDS-PAGE와 같은 denaturing condition에서 시료를 전기영동 시키므로 단백질의 solubilization, aggregation, coprecipitation 등에 대한 문제없이 특정 단백질의 생체 내에서의 발현 및 그 양을 쉽게 비교 분석할 수 있다.
실험 방법은 분석하고자 하는 단백질 시료 혼합물을 SDS-PAGE를 수행하여 단백질들을 크기에 따라 분리하는 단계(SDS-PAGE of proteins), gel 상에 분리된 단백질들을 nitrocellulose, PVDF 또는 nylon 등과 같은 membrane 에 blotting 하는 단계 (Electrotransfer), 단백질들이 blot 된 membrane에 antibody가 nonspecific binding 하는 것을 막기 위한 단계 (membrane blocking)와 대상 단백질에 특이적으로 반응하는 항체(primary antibody)와 항체에 반응하는 secondary antibody(enzyme-linked)와 기질을 이용한 검출 단계 (Immunodetection)로 진행된다.

참고 자료

없음