[분자유전학] SDS page

소개글

분자유전학 실험 레포트
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목차

1. 전기영동법

2. SDS (Sodium Dodecyl Sulfate)

3. SDS의 기능

4. SDS-PAGE (SDS-Polyacrylamide Gel Electrophoresis)

5. Polyacrylamide Gel

6. 단백질 spot의 검출

7. 단백질 해석법

본문내용

1. 전기영동법
분자생물학 연구에서는 종종 단백질이나 핵산들을 각각 서로 분리할 필요가 있다. 예를 들어 우리는 특정 효소를 세포 추출액으로부터 분리하여 이용하거나 또는 그 효소자체의 기능을 연구할 때가 있다. 뿐만 아니라 우리는 효소반응에서 생산되거나 변형된 특정 DNA나 RNA 분자를 분리하기도 하고, 단순히 다양한 RNA 또는 DNA 조각들을 서로 분리할 필요가 있기도 하다. 여기서 분자의 분리에 쓰이는 가장 보편적인 방법들을 설명하려고 하는데, 핵산과 단백질을 분리하는 방법에는 전기영동, 이온교환크로마토크라피 그리고 겔 여과 크로마토크라피가 있다.
전기영동(gel electrophoresis)은 서로 다른 핵산과 단백질을 분리하는데 쓰인다. 그러면 먼저 DNA 전기영동에 대해 알아보자. 이 기술은 먼저 홈이 파인 겔을 만들어야 한다. 다음에는 DNA를 홈에 넣고 전류가 겔 사이를 흐르도록 한다. DNA는 인산기 때문에 그 골격에 음전하를 띠고 있으므로 겔의 끝 쪽에 있는 양성축(양극)을 향하여 이동하게 된다. 겔이 서로 다른 DNA들을 분리할 수 있는 비밀은 마찰력이다. 작은 DNA 조각은 용매와 겔 분자들로부터 약간의 마찰력을 받아 빠르게 이동한다. 역으로 큰 DNA 조각들은 비례적으로 큰 마찰력을 받기에 천천히 움직인다. 결과적으로 전류가 DNA 조각들을 각각의 크기에 맞게 분리시키는 것이다. 가장 큰 것은 위에, 가장 작은 것은 아래에 위치하게 된다. 최종적으로 DNA는 형광염료로 염색하여 자외선하에서 볼 수 있게 된다. DNA 조각의 이동정도와 조각들의 질량(또는 염기의 수)의 로그값을 두 축으로 하여 그래프를 만들 수 있다. 모르는 DNA를 알고 있는 표준 DNA 조각들과 함께 전기영동하고, 모르는 DNA 크기의 표준범위 안에 들어올 경우에는 이들의 크기를 대략 예측할 수 있다. 예를 들어 어떤 DNA가 20mm 이동했다면 이 DNA는 약 910bp이다. 같은 법칙이 다양한 크기의 RNA 전기영동에도 적용된다.
커다란 DNA의 크기를 결정하는 일은 특별한 기술을 필요로한다. 왜냐하면 DNA 크기가 너무 클 경우 전기영동상의 이동거리와 DNA 크기의 로그값의 관계가 일직선에서 벗어나는 경향이 있기 때문이다. 또 다른 이유 중 하나는 이중나선 DNA가 길고 얇아서 상대적으로 딱딱한 막대 같다는 것이다.

참고 자료

1. R. F. Weaver / 분자생물학 / 월드사이언스 / 2003 / pp84~86
2. 손기남 외 / 생물유기화학 / 미학사 / 2001 / pp337~367
3. 응용기기분석 / 이상천 / 경남대학교 출판부 / 2004 / 87~90